1、测定出前者就可以推算出后者。这就是荧光定量PCR的原理。
2、荧光定量pcr原理如下：荧光定量PCR（Real-time PCR），是指在PCR扩增反应体系中加入荧光基团，通过对扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
3、荧光定量pcr原理是：在PCR扩增反应体系中加入荧光基团，通过对扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。
4、PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。
5、Real-time qPCR技术的定量原理 扩增曲线 在Real-time qPCR中，对整个PCR反应扩增过程进行了实时的检测并记录其荧光信号，随着反应的进行，监测到的荧光信号可以绘制成一条曲线，即为扩增曲线。荧光扩增曲线一般分为基线期、指数增长期和平台期。
第一代传统PCR技术，采用琼脂糖凝胶电泳的方法对PCR产物进行定性分析。第二代荧光定量PCR技术，通过在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控PCR进程，最后用Cq值对基因进行定量分析。
实时定量PCR（qPCR）技术：实时定量PCR是一种可以实时监测PCR扩增过程的技术。它结合了PCR和荧光探针技术，能够在PCR反应进行的同时，对DNA量进行定量分析。该技术主要用于：基因表达定量分析： qPCR可以用来精确测量特定基因在生物体内的表达水平，从而研究基因的调控机制和生物学功能。
普通PCR即第一代PCR技术，以双链DNA为模板，以dNTP为底物，特异性地扩增双链DNA，然后采用琼脂糖凝胶电泳对产物进行定性分析。
数字PCR是一种核酸检测和定量分析的新方法，可以作为传统实时定量PCR的替代方法，以实现绝对定量及稀有等位基因的检测。数字PCR的工作原理在于将DNA或cDNA样品分割为许多单独、平行的PCR反应，部分这些反应包含了靶标分子（阳性），而其他不包含（阴性）。单个分子可以被扩增一百万倍或更多。
1、若基因Y和b-actin扩增效率不一致，那么y1/y2就不能反映实际情况了。
2、肯定不行的。荧光定量pcr通过以内参基因作为标准进行相对定量，即众所周知的2–ΔΔCT 法，（前提是要求在所有测试样本中恒定表达的已知参照基因，而且表达水平不受研究条件及处理方式的影响）。如果实验组和对照组的目的基因ct值非常接近（前提是cDNA稀释的倍数一致）， 说明二者的目的基因无明显变化呀。
3、当然这计算方法是基于荧光定量的数学计算模型简化来的，平时使用没什么问题，如果两个目的基因的扩增效率不一样，这个计算方法是不能用的。
4、有多种原因。如果根据经验目的基因的表达确实应该低于内参基因的话，常见的问题是模板异常，如严重的DNA污染等。但也不排除其他原因，如引物特异性等。
